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基因组文库(genomic library)构建服务|实验技术服务——pczn1质粒+arctic express宿主菌低温表达体系。

我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。

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测序实验流程：

基因组dna文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组dna文库的大小应足够大，以便包括所有的基因dna顺序。dna克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组dna文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体能容纳10-50kb插入dna，载体类型应根据所要基因组dna的大小和用途来选择。

构建一个基因组dna文库的基本步骤：

①分离纯化基因组dna；

②切割dna成合适大小的片段以用于克隆；

③载体dna的制备；

④把基因组dna段和载dna连接；

⑤包装重组分子；

⑥测定入噬菌体滴度；

⑦扩增dna文库；

⑧评估文的质量。

基因组文库构建步骤：1、载体：

l噬菌体：48.5kb,插入型(多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，适19-20kb)， embl, charon 粘性质粒(cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，多可容纳46kb。 酵母人工染色体克隆体系（yac，yeast artificial chromosome ?cloning system） 插入大小200—1000kb 2、 载体dna的制备： 高分子量的外源dna 100-150kb载体dna酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 www.cqwe（常用bamhi） ? （蔗糖密度梯度离心） ?（碱性酶） 3、连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白 4、感染宿主菌：选择合适的宿主菌，le392, nm538, nm539, kw251等 5、基因组文库的保存和扩增： 6、测滴度，要在106fu以上

7、保存：仿4℃，7% dmso -70℃

产生dna段的方法要求切点随机性高，使任一基因都可能被完整地克隆，并且好在两侧都留有粘性末端以利于 dna段间的连接。机械剪切方法的优点是随机性高，可是所得片段两端没有粘性末端，有时较为不便与载体连接。用限制性核酸内切酶酶解的随机性较差，但是两端有粘性末端,便于和载体相连接（见重组dna技术）。