关键词:滑膜细胞原代培养|实验技术服务

简介：世界优秀品牌滑膜细胞原代培养|实验技术服务原装正品，质量保证,价格优惠。

滑膜细胞原代培养|实验技术服务——pczn1质粒+arctic express宿主菌低温表达体系。

我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。

产品品牌：滑膜细胞原代培养|实验技术服务 ?

测序实验流程：

一、实验材料准备

1. ? 滑膜组织：将外科手术切下的组织在手术台上请将放入低温生理盐水中，在手术完成时将放入pbs冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。

2. ? 试剂：4 mg/mlⅰ型胶原酶(α-mem配制)，培养液(含10%胎牛血清的α-mem)。

3. ? 器械：手术器械。

二、方法

1. ? 将切下的组织在手术台上请将放入低温生理盐水中(静止)，在手术完成时将放入pbs冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。

2. ?在超净台中将放入培养皿中，加入α-mem洗涤。

3. ?获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化)，仔细剔除脂肪组织，用α-mem洗二次(以去除红细胞)，放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎。

4. ? 用双倍获得组织的体积含有4 mg/mlⅰ型胶原酶的α-mem消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次)

5. ? 30分钟后收集管细胞：细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤，用1500-2000转离心6分钟，上清为ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织，继续用于消化。

6. ? 离心管底细胞用α-mem离心洗涤2次，每次用α-mem重悬浮后用1500-2000转，离心6分钟，后一次用记数板观察到有细胞。细胞终悬浮于含有10%胎牛血清的α-mem中，接种到培养瓶中培养。

7. ?60钟后收集第二管细胞：细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤，用1500-2000 rpm离心6分钟；用α-mem洗2次，每次用α-mem重悬浮后用1500-2000 rpm离心6分钟，后一次用记数板观察细胞并计数。细胞终悬浮于α-mem含有10%胎牛血清中，接种到培养瓶中培养。

8. ? 必要时可做第三管细胞收集；并立即作原代滑膜细胞培养。

9. ?每2-3天换液一次。

注意事项

1. ? 用0.25% trypsin或0.25% trypsin＋ 0.02% edta 或 collagenaseⅰ或collagenaseⅱ消化细胞或合用，只有单用collagenaseⅰ有用、好；

2. ? 机械法很难获得细胞；

3. ?全培用α-mem或rpmi1640或dmem，加10%胎牛血清。不能用小牛血清，胎牛血清用国产即可；

4. ?必须用ca2+-free的pbs。